Tesztorganizmus neve | |
Latin név | Daphnia magna |
Magyar név | Nagy vízibolha |
Angol név | Water flea |
Rendszertani besorolás | |
- ország | Animalia (Állatok) |
- törzs | Arthropoda (Ízeltlábúak) |
- osztály | Branchiopoda (Levéllábú rákok) |
- rend | Cladocera (Ágascsápú rákok) |
- család | Daphniidae |
- nemzetség/nem | Daphnia (Vizibolhák) |
- faj | Daphnia magna (Nagy vizibolha) |
Tesztorganizmus jellemzői | |
Élőhely | Édesvíz |
Fontosabb külső jegyek | Az állat törzsét két félből álló áttetsző héj burkolja, melyből csak a feje nyúlik ki, és lefelé egy tüskében folytatódik. Az egyedek kb. 6 mm nagyságra is megnőnek.[13][14] |
Táplálkozás | Egysejtű algákkal, általában Scenedesmus subspicatus vagy Chlorella vulgaris fajokkal táplálkoznak. |
Szaporodás | Egy nőstény általában egyszerre 4–10 ivadéknak ad életet (ez időszak alatt a kikelt lárvák is nőstények).[15] Kétféle szaporodási folyamat ismert, egyivaros (parthenogenetikus) illetve a kétivaros szaporodás. Az első esetben kialakult peték az állat hátán levő költőüregben fejlődnek kész vízibolhákká. Az embriók fejlődése az anyaállat testében akár mikroszkóp nélkül is megfigyelhető. A kétivaros szaporodáskor különleges tartós peték képződnek, melyek a költőüregben kialakuló költőtasakokban helyezkednek el. Ezek szabadba kerülnek, a víz felszínén sodródnak, és át is telelnek. A fiatal nőstények négy napos koruktól már minden harmadik napon tovább szaporodnak, körülbelül 40 napos életükben akár 25 alkalommal.[15] |
Egyéb fontosabb jellemzők | - |
Szabványok és referenciák | |
Szabványosított tesztmódszer? | Igen |
Szabvány típusa, száma |
|
Nem szabványos tesztmódszerek | - |
Környezettoxikológiai alkalmazás | |
Tesztorganizmus fenntartása | Egysejtű algákkal táplálkoznak, általában Scenedesmus subspicatus vagy Chlorella vulgaris fajokkal. Baktériumokat és élesztőt is esznek, ezek azonban könnyen túlszaporodnak, és anaerob körülményeket alakítanak ki a tenyésztővizükben. Minimum két naponta szükséges etetni őket. Tenyésztővíznek bármilyen víz alkalmas. Lehet tápsókból és desztillált vízből előállított mesterséges víz, csapvíz, forrásvíz, vagy akár szűrt akváriumvíz. A táplálkozáshoz 5*103 sejt/ml algát kell tartalmaznia.[14] Szaporodásukhoz nem szükséges fény, mégis célszerű megvilágítást alkalmazni. Ezzel ugyanis elősegíthetjük az algák szaporodását, az oldott oxigén megfelelő mennyiségét, valamint megakadályozhatjuk a baktériumok elszaporodását, vagyis az anaerob körülmények kialakulását. |
Teszteléshez használt organizmus jellemzői | Teszteléshez a laboratóriumban nevelt harmadik generáció alkalmazható. |
Tesztorganizmus érzékenysége | Vízben oldódó vegyi anyagok |
Tesztmódszer alkalmassága | Felszíni vizek, talajvizek szennyvizek toxikológiai vizsgálata. |
Tesztelés elve | Egy fajt alkalmazó, laboratóriumi, akut immobilizációs teszt |
Tesztmódszer leírása | Daphnia szívritmus vizsgálati teszt[16] Előkészítés Tápoldat elkészítése az alábbi kémiai jellemzőkkel:
Előzetesen szükséges egy 24h-s teszt elvégzése annak érdekében, hogy meghatározzuk az adott hatóanyag kivált-e valamilyen változást a tápoldat kémiai jellemzőiben, valamint hogy meghatározzuk az egyes hatóanyagok későbbi tesztek során alkalmazandó koncentráció tartományait.
Szívverés vizsgálata A vizsgálandó vegyületből öt tagú hígítási sort készítünk, minden hígítási tagnál 10 tesztállatot tesztelünk 10 perc, 24 óra és 48 órás kontaktidővel. Az állatkákat vájt tárgylemezre helyezve sztereomikroszkóppal jól megfigyelhető a szívverés szám. Minden állatka szívverését 3x10 sec-ig mérjük, majd átlagoljuk. A szennyezőanyag által okozott szívverés szám csökkenést egy kontroll csoport szívverés számához viszonyítjuk. Ezáltal gátlási %-ot vagy EC20/EC50 értékeket tudunk megadni. Daphnia akut immobilizációs teszt[14] Előkészítés 20-30 db több mint 7 napos, testükben embriókat hordozó anyaállatot választunk ki. A születés után 10 db 24 órás állatot különítünk el. Kivitelezés125 ml-es főzőpohárba bemérjük az 50 ml vizsgálandó vízmintát, majd belehelyezzük a 10 db 24 órás állatot. 96 órán át 20-25 °C-on 8:16 órás világos:sötét ciklusú megvilágítás mellett inkubáljuk a tesztorganizmusokat. 24 óránként megszámoljuk a mozgásképes állatokat. Kiértékelés
|
Mérési végpontok | Immobilizáció, letalitás, szívritmus mérése |
Vizsgálati végpontok | EC20, EC50, LC20, LC50, Pl.: [17] Karbendazim: EC50 = 0,15 mg/L (48 órás) |
Méréshez szükséges műszerek | osztályozóháló, sztereomikroszkóp |
Tesztek időigénye | Akut teszt: 96 órás, krónikus teszt: 21 nap |
Egyéb | |
Megjegyzések | A teszt előnye, hogy kivitelezése nem költséges, magának a tesztnek a környezeti- és egészségkockázata kicsi, időigénye szintén kicsi. Hátránya, hogy kényes a víz minőségére és egyes esetekben túlzott érzékenységet mutat. |
[1] OECD/OCDE 211 (2012) OECD guideline for the testing of chemicals; Daphnia magna Reproduction Test
[2] OECD/OCDE 202 (2004) OECD guideline for testing of chemicals; Daphnia sp., Acute Immobilisation Test
[3] OPPTS 850.1010 OPPTS 850.1010 Aquatic Invertebrate Acute Toxicity Test, Freshwater Daphnids
[4] OPPTS 850.1300 OPPTS 850.1300 Daphnid Chronic Toxicity Test
[5] ASTM E1193 – 97 (2004) ASTM E1193 - 97(2004) Standard Guide for Conducting Daphnia magna Life-Cycle Toxicity Tests
[6] ISO 6341:1996 Determination of the inhibition of the mobility of Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea) -- Acute toxicity test
[7] ISO 10706:2000 Determination of long term toxicity of substances to Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea)
[8] MSZ 21976-18:1993 Települési szilárd hulladékok vizsgálata. Daphniateszt
[9] MSZ 21978-13:1985 Veszélyes hulladékok vizsgálata. Daphniateszt
[10] MSZ EN ISO 6341:1998 A mobilitásgátlás meghatározása Daphnia magna Strauson (Cladocera, Crustacea). Akut toxicitási teszt (ISO 6341:1996)
[11] MSZ ISO 10706:2002 Anyagok hosszú távú mérgez? hatásának meghatározása Daphnia magna Straus-on (Cladocera, Crustacea)
[12] DIN 38412-11 (1982) German standard methods for the examination of water, waste water and sludge; Test methods using water organisms (group L); Determination of the effect on microcrustacea of substances contained in water (Daphnia short-time test)
[13] Wikipédia - Kis vízibolha
http://hu.wikipedia.org/wiki/Kis_v%C3%ADzibolha
[14] Ökotoxikológiai módszerek vízi tesztorganizmusokkal, Laborgyakorlat
/sites/default/files/vizi%20tesztorganizmusok.pdf
[15] Molnár Mónika, Feigl Viktória, Gruiz Katalin - Talaj és víz könyezettoxikológiai tesztelése, Egy fajt alkalmazó tesztek
[16] Arturo Villegas-Navarro, Esperanza Rosas-L, José L. Reyes - Teh heart of Daphnia magna: effects of four cardioactive drugs (2003. július 30.)
[17]TOXNET-Toxicology Data Network
http://toxnet.nlm.nih.gov