A Local Lymph Node Assay (LLNA) vagy magyarul Helyi nyirokcsomó teszt alapelve, hogy az élő állatokon alkalmazott bőrszenzitizáló szerrel való kezelés a nyirokcsomókban található limfociták elsődleges osztódását eredményezi azon a helyen, ahol az állat kontaktusba került a vizsgálandó vegyülettel. A limfociták osztódásának mértéke egyenesen arányos az alkalmazott dózissal (és a vegyület allergizáló tulajdonságának mértékével). Az LLNA teszt ezt az osztódást dózisválaszként használja ki összehasonlítva a kontrollcsoport eredményeivel, hogy a bőrszenzitizálás mértékét meghatározza. A kontroll csoport abban tér el a tesztcsoportoktól, hogy a kontroll állatokat, csak azzal a hordozó anyaggal kezelik, melyben a vizsgálandó vegyületet oldják, hogy a tesztállatokat kezelni lehessen vele, és ne közvetlenül, töményen alkalmazzák a bőrfelületen. A tesztállatokban végbement limfocita osztódást elosztják a csak vivőanyaggal kezelt kontrollcsoportban mért limfocitaosztódás értékével, ezzel képezve egy aránypárt, melyet stimulációs indexnek nevezünk. Ha ez az érték minimum 3, akkor nevezhető egy anyag bőrszenzitizálónak.
Minimum 4 állatot kell vizsgálni minden egyes dózis-csoportban, minimum 3 különböző koncentrációjú dózist alkalmazva, továbbá egy negatív és egy pozitív kontrollt. A vizsgálandó anyagok általában 100%, 50%, 25%, 10%, 5%, 2.5%, 1%, 0.5%-os koncentrációkban alkalmazandóak. Ha már létezik bőr irritációs teszteredmény, érdemes azt megvizsgálva a három megfelelő dózist kiválasztani a fenti sorozatból. A vivőanyagot úgy kell megválasztani, hogy a vizsgálandó anyag maximálisan oldódjék benne. Ajánlott vivőanyagok: aceton/olivaolaj elegy 4:1 térfogatarányban; dimetilformamid; metil-etilketon; propilén-glikol; dimetil-szulfoxid. Végül a tesztállatokba A 3H-metil-timidin oldatot fecskendeznek, 5 óra elteltével eltávolítják a nyirokcsomókat.
Az állatokból eltávolított nyirokcsomókat finoman mechanikusan "összetörik", hogy különálló sejtekből álló szuszpenziót kapjanak. PBS oldattal mossák őket, majd 5%-os triklór-ecetsavval kicsapatják őket (4°C, 18h). A képződő pelletet ezután újra szuszpendálják 1 ml triklór-ecetsavban. A 3H-metil-timidin fúzionálást β-scintilláció elvén működő számlálóval mérik, az eredmény hasadás/perc egységekben adódik (disintegrations per minute (DPM).
A vizsgálat pontos részleteiről ebben a dokumentumban olvashat:
http://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2008:142:0001:0739:HU:PDF